RNA抽取實驗及注意事項


RNA抽取主要使用TRIzoI抽提法,TRIzoI主要用于裂解細胞,使細胞中的蛋白核酸物質得到釋放。改進試劑盒抽屜方法,在樣品加入裂解液后,通過高速離心總RNA在高離序鹽狀態下選著吸附于離心柱內硅基質膜上,通過一系列快速漂洗離心。去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質去除,最后低鹽的RNase-freeH20將純凈RNA從硅基質膜上洗脫。

注意事項:
RNA不穩定、容易被降解或污染,因此在進行RNA實驗時,要保持環境的清潔。RNA樣品制備好應儲存在-80℃,盡量避免反復凍融。使用RNA樣品時、應在冰上操作。
預防RNase污染、注意以下幾點
1.經常更換新手套,皮膚經常帶有細菌、可能導致RNase污染。
2.使用無RNase的塑料制品避免交叉污染。
3.RNA在裂解液RL中時不時會被RNase降解。提取后繼續處理過程中應該使用不含RNase的塑料盒玻璃器具。玻璃器具可在150℃烘烤4小時,塑料器具可在0.5M NaOH中浸泡10分鐘,清水徹底洗凈、滅菌可除去RNase。
5.配置溶液應使用RNase-Free ddH20(將水加入到干凈的玻璃瓶中,加入DEPC至濃度0.1%(V/V)混勻放置過夜、高壓滅菌。)

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